利来国际提供的人恶性黑色素瘤细胞WM115培养说明书如下：

一、细胞培养条件

- **细胞名称**: 人恶性黑色素瘤细胞WM115
- **生长特性**: 贴壁
- **冻存条件**: 无血清冻存液
- **培养体系**: MEM + 10% FBS + 1% P/S
- **传代方法**: 首次建议1:2传代
- **备注**: 使用无菌离心管收集培养基以备对比培养。如效果不佳，建议直接购买利来国际的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

将培养至良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口是最佳运输方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒细胞瓶外部以进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将培养瓶放置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长并拍照存档，前三天的照片将作为重要的售后依据。未提供照片将视为状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代:
- 若细胞未超过80%的汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养，若细胞密度超过80%，可进行传代:
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 迅速加入5ml以上完全培养基终止消化，并轻轻吹打使细胞完全脱落。
4. 转移悬液至15ml离心管中，离心1000RPM 5分钟，弃上清，重悬1-2ml完全培养基。
5. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充全新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存:
1. 细胞生长至80%覆盖时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后立即加入5ml完全培养液终止消化，同时轻轻吹打使之脱落。
3. 转移悬液至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
4. 弃去上清，将沉淀细胞加入1ml的利来国际无血清冻存液中，混匀后转入冻存管。
5. 将冻存细胞直接放置于-80℃冰箱中，若后需转入液氮，需在-80℃下储存24小时以上。

c、细胞复苏:
1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴解冻，直至无结晶后擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜培养基，继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会出现不牢固，导致部分脱落，这是正常现象。若脱落较多，可收集培养液至离心管，进行1000RPM离心，收集上清作过渡培养。沉淀加入胰酶消化，然后重悬，进行1-2分钟消化，再加入5ml完全培养基终止反应。处理后按1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，最后培养于37℃，5% CO2培养箱中。

五、售后条款

1）在以下情况下，细胞出现问题可进行重发：
- 细胞运输破损、丢失，或培养液严重泄漏。
- 细胞污染需在收到48小时内提供真实实验结果经核实后重发。
- 常温及干冰运输的细胞复苏后若未存活，需真实清晰的照片。
2）不予重发的情况包括：
- 客户自身造成的细胞污染或不当操作。
- 非推荐培养体系所导致的细胞状态不佳。
在发生任何问题时，必须在规定时间内通知我们的技术人员进行评估，并根据评估结果进行后续处理。

在细胞培养过程中，请充分了解利来国际提供的指导说明，以确保细胞的健康和实验的成功。