细胞转染是一种将外源性遗传物质导入目标细胞的技术,广泛应用于生命科学研究、药物研发和新药开发等领域。化学转染法是最常用的转染方式,其主要优势在于通过控制化学物质的浓度和作用时间,可以精准调节转染的效率和进程。而选择合适的转染试剂,是确保细胞转染实验成功与高效的核心要素。目前市场上的转染试剂种类繁多,质量参差不齐,选择合适的产品需要综合考虑以下几个方面。
1. 根据实验目的
选择转染试剂时,应根据实验的需求进行稳定转染或瞬时转染的选择。两者虽然步骤相似,但对外源基因的要求不同,稳定转染通常需要具有复制能力的质粒或病毒载体,而瞬时转染则不需要。稳定转染一般使用脂质体类试剂,通过细胞内吞作用实现;而瞬时转染则更多使用纳米聚合物类试剂。
2. 根据细胞种类
不同类型的细胞对转染效率的影响差异显著。例如,HEK293T细胞容易转染,对导入载体的需求较宽松,因此常用于功能性蛋白和抗体的生产。然而,在肿瘤细胞或相关药物研究中,某些癌细胞(如HepG2、A549等)的转染效率较低,给实验带来挑战。贴壁细胞与悬浮细胞也对转染试剂的需求有所不同,通常贴壁细胞使用脂质体进行转染,而悬浮细胞则更适合聚合物方法,具体选择还需根据细胞种类进行调整。
3. 根据基因种类
转染通常涉及DNA和RNA两种类型。DNA转染主要用于将外源DNA片段导入真核细胞,以实现基因表达和蛋白质合成;RNA转染则主要用于研究特定基因功能的干扰RNA导入。不同的转染试剂在转染DNA或RNA时,其效果和细胞毒性也会有所不同,尤其是当DNA载体大小超过10,000bp时,转染难度明显增加,现有试剂往往难以实现有效转染。
4. 根据转染效果
理想的转染试剂应具备高效转染与低细胞毒性。高效转染可确保更多外源基因导入细胞,而低细胞毒性则有助于提高细胞存活率,从而保证实验结果的可靠性。在市面上的转染试剂中,脂质体通常具备较高的细胞毒性,而细胞死亡率一般在15%至30%之间。总体而言,细胞死亡率低于15%的转染试剂更具市场竞争力。
5. 根据操作简便性
选择操作简便、节省时间的转染试剂,能够显著优化实验的时间成本。操作简便性包括转染前后是否需更换培养基、试剂成分数量、孵育方式及时间、核酸溶液的稀释等。简化的操作流程有助于在设计多组平行对照实验时,降低材料和时间成本,提高实验效率。
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利来国际的转染试剂系列采用纳米阳离子聚合物,能够有效与带负电荷的核酸结合,促进其进入细胞进行转染,适用于siRNA和质粒DNA的高效转染。
- 转染效率:针对常用细胞如HEK293/293T,转染效率超过95%;在CHO-K1、MCF7、HepG2等细胞中也表现良好。- 细胞毒性:细胞毒性低,转染48小时后细胞活率保持在85%。- 操作便捷:使用利来国际的转染试剂无需更换至无血清培养基,极大地节约了实验时间和材料成本。
实验提示
在进行转染实验时,需要考虑以下因素:1)抗生素:虽对真核细胞无毒,但可能影响细胞转染效率。2)血清:血清含量影响转染复合物形成。3)细胞状态:使用经过少量传代的细胞以保证活力。4)细胞密度:贴壁细胞应保持60%-90%汇合度,悬浮细胞控制在1x10^6到5x10^6细胞/mL。5)核酸质量:高纯度无内毒素的核酸有助于提高转染效率。