利来国际的胎牛血清标准储存温度为-20℃,如需长期保存可在-80℃下贮存。解冻时,不建议将其直接置于常温(25-37℃)中,因为这样容易形成絮状沉淀,进而可能影响血清质量。推荐的解冻方法是:先将血清从-20/-80℃转移至4℃,待完全解冻为液体后,再转至室温。在解冻过程中,应定期轻轻摇晃,以便使血清成分和温度均匀混合,减少沉淀的产生。
解冻后,可以将血清分装于15mL或50mL的无菌离心管中进行再次冷冻。根据实际使用情况,建议在4℃下存放一管已解冻的血清,方便经常配制培养基。然而,4℃下也不宜存放过久,最好在一个月内使用完。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下长期存放,以避免重要细胞生长因子的失活,影响细胞状态。
在添加血清时,应控制添加量,通常使用5%、10%或20%的浓度,大多数细胞的常规培养适合使用10%的血清浓度,而部分细胞在原代提取时可使用20%血清。具体适合的血清浓度需根据细胞特性和实验目的进行探索。
谈到热灭活,通常是在56℃下处理已解冻的血清30分钟。这一加热步骤能去活化补体,补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺释放、增强吞噬作用以及淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。对于常规细胞培养而言,热灭活并不是必要步骤,经过处理的血清可能会由于高温影响其质量,从而导致细胞生长速率下降、沉淀物增多等问题。
在细胞培养中,细胞更换血清时,可能会出现细胞增殖变慢甚至脱壁死亡的情况。这通常是因为细胞已经适应了以往的培养环境,而突然更换新的营养环境会导致不适应。更换血清时,推荐按照梯度逐步替换,以帮助细胞慢慢适应新环境。使用原培养体系进行细胞复苏,待状态恢复后再进行测试,手段为首次1:3梯度替换,随后逐步调整比例,直到完全替换。
如解冻后发现有少量乳白色絮状或点状物质,主要是由血清中的脂蛋白变性及纤维蛋白造成,其不会影响血清质量,建议通过400×g离心5分钟后取上清。一般情况下,厂家提供的血清为无菌,不必再进行过滤,如发现有悬浮物可与培养液一同过滤,注意不要直接过滤血清。
在细胞培养过程中,如发现黑点生成,应先观察培养基是否浑浊,黑点是否游动不规则。如有污染,细菌等会大量繁殖,导致培养基迅速变黄、混浊。若在显微镜下细胞生长状态良好且无变化,黑点可能由以下原因造成:(1)细胞自然破碎后的残骸;(2)血清中杂蛋白的积聚,可能源于反复冻融;(3)配制培养基的水质及容器不合格。可通过离心、过滤等方法去除杂质;(4)原代细胞中出现小黑点,可能为原代组织杂质,通过多次传代可消除。
当前利来国际提供多种规格的胎牛血清,供科研工作者选择,同时有完善的售前和售后服务,值得信赖!