在上期中，我们介绍了细胞转染的应用和分类的基础知识。在本期中，我们将深入探讨细胞转染中常用的病毒转染相关内容。病毒转染是一种以病毒载体介导的高效细胞转染技术，能够将外源基因包装进病毒的外壳中，并利用病毒的天然感染能力将外源基因导入宿主细胞，实现稳定表达。根据不同的病毒载体，病毒转染通常分为腺病毒（Adenovirus, ADV）、慢病毒（Lentivirus, LV）、逆转录病毒（Retrovirus, RV）和腺相关病毒（AAV）。目前，实验室中使用较多且应用范围广泛的病毒是慢病毒，下面将重点介绍慢病毒。

一、慢病毒结构

慢病毒是一种基于HIV-1开发的基因治疗载体，属于有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称结构。病毒颗粒的最外层为包膜，其中的包膜蛋白决定了其感染的细胞类型，包膜内是基质蛋白和衣壳，最里面则包含两条相同的正股RNA链以及一些酶，如逆转录酶、整合酶和蛋白酶。

慢病毒的基因组结构复杂。以HIV-1为例，它是一种单链RNA病毒，含有9个基因，基因组两端各有一个反向末端重复序列（LTR），中间包括编码病毒的结构基因（gag、pol、env），调节基因（tat、rev）以及辅助基因（vif、vpr、vpu、nef）。随着对慢病毒基因组的深入研究和转染技术的发展，科研人员对慢病毒基因组进行了编辑，将其基因分散于不同的质粒中，不断改进安全性和包装能力，最终衍生出第一代、第二代和第三代慢病毒系统。目前应用较广的是第二代和第三代质粒系统，第二代三质粒系统包含一个包装质粒和一个包膜质粒，以及一个穿梭质粒。

二、慢病毒复制与包装

为了提高靶细胞转染的效率，前期需要获得高滴度的慢病毒，这一过程被称为慢病毒的复制包装。通常，通过一定比例将三种质粒共同转染至293T细胞中，经过48-72小时的孵育后，可从含有病毒的上清液中离心收集或进一步浓缩。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒感染细胞的首步是其表面的包膜蛋白与宿主细胞表面受体结合，随后病毒与细胞膜融合，释放内部结构蛋白和酶。在逆转录酶作用下，慢病毒的RNA进行逆转录，并与整合酶形成整合前复合物，之后该复合物进入宿主细胞核，由整合酶催化整合至宿主基因组，而外源基因在宿主细胞质中实现表达。

四、常见的慢病毒转染类型

利来国际提供几种常见的慢病毒转染类型：

• 慢病毒荧光转染：通过转染带有荧光团的基因（如GFP、mCherry、RFP等），筛选出携带荧光蛋白的目的细胞。可通过倒置荧光显微镜或流式细胞仪检测转染后荧光强度以评估转染效率。
• 慢病毒Luciferase化学发光转染：导入携带荧光素酶编码基因的质粒后，细胞可以产生荧光素酶，使得底物在ATP的作用下发出光。此方法用于检测活体动物中肿瘤的生长与转移。
• 慢病毒细胞永生化转染：此方法打破细胞的分裂次数限制，使其获得延缓衰老的能力，通过慢病毒转染技术将外源性永生化基因引入细胞，获得具备无限增殖潜力的永生化细胞株。

利来国际专注于常用细胞系和原代细胞的慢病毒转染，包括慢病毒转染绿色荧光蛋白（ZsGreen）、红色荧光蛋白（mCherry、RFP）、化学发光LUC以及SV40永生化转染，拥有近40种稳定转染细胞系，也可为指定细胞进行慢病毒转染。我们的服务涵盖多种实验目标，旨在满足您的科研需求。