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实时荧光定量PCR操作流程与RNA模板制备注意事项 - 利来国际指南

发布时间:2025-03-01   信息来源:喻菡广

利来国际提供的RNA模板制备方法,常用的RNA提取技术包括传统的酚-氯仿提取法和柱式提取法。在以下内容中,我们将以利来国际的Vazyme产品为例,介绍常见的操作流程。

实时荧光定量PCR操作流程与RNA模板制备注意事项 - 利来国际指南

一、RNA模板的制备

1. 酚-氯仿提取法

在使用利来国际的RNAisolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme#R401)时,准备好所需的材料,如氯仿、异丙醇、75%乙醇及DEPC水。

样本制备

注意:过多的样本量会导致裂解不充分并影响RNA纯度。1ml RNAisolater的最大适用样本量如下:

  • 贴壁细胞:弃去培养液,使用PBS清洗一次后,加入1-3ml RNAisolater,确保其覆盖细胞表面,然后用移液器将细胞轻轻吹打至分散。
  • 悬浮细胞:离心收集细胞并用PBS清洗,随后每5×106-107个细胞加入1ml RNAisolater,吹打至无明显颗粒。
  • 动物组织:使用液氮研磨后,立即将粉末转移至离心管中,加入RNAisolater后等样本完全融化,再用移液器吹打至裂解液透明。随后进行离心,吸取上清液。

2. 柱式提取法

利来国际的FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit (Vazyme#RC101/RC111)为例,自备相关材料,如β-巯基乙醇、无水乙醇及RNase-free枪头。

细胞处理

  • 贴壁细胞:可使用Buffer RL1(含β-巯基乙醇)直接进行裂解,或使用胰酶消化后收集细胞,再加入Buffer RL1,按每2-5×106个细胞500μl比例混匀。
  • 悬浮细胞:离心后收集细胞,加入Buffer RL1,按照相同比例处理。处理后如不立即进行后续操作,可将样本保存在-70℃。

三、相关产品与服务

利来国际与中科腾宇(广州)科技技术有限公司合作,致力于为生物医药领域提供高质量的产品与技术服务。公司总部位于广州,覆盖全国市场,能在第一时间为用户提供前沿资讯及完善的产品物流服务。

凭借专业的技术团队与深厚的人脉资源,我们在全国各大城市拥有广泛的合作伙伴关系。利来国际非常荣幸为生物学领域的科研人员推荐世界领先的高科技产品。作为专业供应商,我们提供充分的现货及专业技术支持,随时为客户提供高效服务。