菌种保藏（culture preservation，culture collection）是确保微生物菌株活力与遗传特性的关键技术。在生物医疗研究中，尤其是在基因编辑和改造的微生物菌株方面，保护这些珍贵资源尤为重要。以下是利来国际推荐的菌种保藏具体操作步骤：

菌种保藏步骤

在进行菌种保藏时，首先将待保存的菌液与配制好的甘油混合液以1:1的比例混合，最终甘油浓度应达到20%。具体操作如下：

• 配置40%（v/v）的甘油灭菌水混合液。
• 取2ml离心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。
• 使用移液枪吸取500微升菌液，注意将枪头浸入液面以下缓慢加入。
• 将离心管或保菌管置于-80℃冰箱中保存。

在保菌管上标明操作日期、菌种名称及抗性等详细信息，确保未来可识别。

菌液复苏

在需要进行后续操作时，可以对保存的菌液进行复苏。主要步骤如下：

• 准备含有抗性的LB培养基，每个培养管装入约八毫升的培养基。
• 所有操作应在无菌操作台上进行，以避免污染。
• 向每管加入100微升菌液，随后在37℃、180rpm条件下摇床培养12小时。

抗性配置与培养基制备

氨苄抗性配置：将1g氨苄青霉素钠溶解于10ml的灭菌水中，过滤后置于-20℃保存。LB培养基则可按以下配方制备：

• 10g氯化钠、10g胰蛋白胨和5g酵母提取物溶解于一升溶液中，分装至250ml的锥形瓶，每瓶100ml。

最后，在100ml的培养基中加入100微升的氨苄青霉素进行抗性标记。

通过这些简单而有效的步骤，您可以成功保藏和复苏珍贵的微生物菌株，助力日后的生物医疗研究，为您提供利来国际可靠的技术支持与服务。