通用细胞冻存试剂盒使用说明书(BA3309)

一、产品简介

本产品专为各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系等的冻存保种设计，能够有效保持细胞复苏后的存活率，并在储存时保持稳定性，使用过程简便流畅。

产品组分：通用细胞冻存液BA3309，100mL

保存条件：-20℃避光保存，有效期为两年。

二、注意事项

1. 必须使用水平离心机，并根据实验需要设置适当的离心参数，以确保实验结果的准确性。

2. 本产品为无菌产品，请务必穿着实验服和佩戴一次性手套，确保无菌操作，以防止微生物污染。

3. 使用前确保试剂完全融化并充分混匀。

4. 在冻存前尽量确认细胞处于良好状态。

三、自备材料

细胞冻存材料

1. 仪器：水平离心机、细胞计数仪、-80℃冰箱。

2. 耗材：细胞冻存管、程序性冻存盒、低吸附枪头。

四、细胞复苏材料

1. 仪器：水平离心机、水浴锅。

2. 试剂：RPMI 1640培养基。

3. 耗材：酒精棉球、低吸附枪头、离心管。

五、使用方法

细胞冻存

1. 使用前将通用细胞冻存液完全融化并混匀。

2. 使用细胞计数仪测定细胞总数，通常建议冻存密度为1x10⁶/mL。

3. 将细胞离心，去除上清液，保留细胞沉淀。不同细胞类型的离心条件可能不同，例如人PBMC细胞的离心条件为300xg，5分钟。

4. 根据细胞数量计算需加入的细胞冻存液体积，使用移液枪吸取并轻轻重悬细胞。

5. 根据体积将细胞分装至细胞冻存管中，并进行标记。请注意，须使用专为液氮冻存设计的细胞冻存管，避免使用普通离心管。

6. 将细胞冻存管放入可逐步降低温度的装置中，如程序性冻存盒，然后放入-80℃冰箱，确保降温速度约为1℃/分钟。24小时后可转入液氮中保存，以延长保存时间。

细胞复苏

1. 打开恒温水浴锅，设置温度为37℃，准备一个离心管，加入5mL细胞培养基，并在水浴中加热至37℃，约2-5分钟。

2. 取出冻存管，立即放入水浴锅中快速摇晃，以便冻存液迅速融化。

3. 完全融化后，用酒精棉球擦拭冻存管外部以降低污染风险。

4. 打开冻存管，将冻存液缓慢滴加入已加热的培养基中，边滴加边摇晃，结束后放入水平离心机，4℃，300xg离心5分钟。

5. 去除上清液，加入适当体积的培养基以重新悬浮细胞。

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