Trizol试剂的核心成分为苯/酚，其主要作用是裂解细胞，以便释放细胞内的蛋白质和核酸。尽管苯/酚能有效导致蛋白质变性，但它无法完全抑制RNA酶的活性。因此，Trizol中还添加了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍和β-巯基乙醇等成分，以抑制内源性和外源性RNA酶的活性。Trizol试剂是从细胞或组织中直接提取总RNA的理想选择，其裂解液或匀浆能有效保持RNA的完整性。

在操作过程中，加入氯仿（CHCl3）并进行离心，样品会分为水相层和有机层，RNA则存在于水相层中。收集水相层后，RNA可通过异丙醇沉淀恢复。在去除水相层后，样品中的核酸和蛋白质也可以相应地以沉淀形式回收。通过添加75%乙醇，可以析出中间层的DNA，而在有机层中再加入异丙醇，则能析出其中的蛋白质。值得一提的是，Trizol试剂不仅适用于小样品（组织：50-100mg；细胞：5×10⁶），也能够处理大样品（组织≥1g或细胞≥10⁷）。此外，它适合用于动物、植物、细菌及血液样本处理，能够同时处理多种不同类型的样品。

该方法反应迅速，提取的总RNA不含DNA和蛋白质污染，适用于北方印迹（Northern blot）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、RNA酶保护分析等多种实验。

TRIZOL提取RNA步骤

1. 在提取组织RNA时，每50～100mg组织需用1ml Trizol试剂进行裂解；提取细胞RNA时，先将细胞离心沉淀，每5-10×10⁶个细胞加入1ml Trizol，随后使用枪头反复吹打或剧烈振荡以裂解细胞。
2. 将组织或细胞的Trizol裂解液转移至EP管中，在15~30°C室温下放置5分钟；然后，根据每1ml TRIZOL加入0.2ml氯仿（lv仿），盖紧EP管，在手中剧烈震荡15秒，随后在室温下放置2～3分钟后，以12000g的速度（2℃～8℃）离心15分钟。
3. 取上层水相置于新EP管中，按照每1ml TRIZOL加入0.5ml异丙醇的比例添加异丙醇，室温下（15℃～30℃）静置10分钟，随后以12000g的速度离心10分钟。
4. 按照每1ml TRIZOL加入1ml 75%乙醇的比例进行洗涤，进行涡旋混合后，以7500g（2°C～8°C）离心5分钟，弃去上清液；沉淀的RNA应在室温下自然干燥，并使用无RNA酶的水溶解RNA沉淀。

注意：在收集生物材料后，最好立即进行RNA制备；若需暂时储存，建议使用液氮迅速冷冻生物材料，并储存于-80℃的冷冻柜中。在RNA制备时，请从冷冻柜中取出材料后，立即用液氮研磨以破坏细胞，切勿先解冻，以避免RNase影响RNA的完整性。