细胞迁移实验的标准操作流程

细胞培养与准备

首先，按照标准细胞培养方案在血清培养基中培养目标细胞。在检测前一天，使用无血清培养基（0.2% BSA）进行培养。经过一夜的无血清培养后，吸出细胞培养基，并用PBS清洗细胞。

接下来，加入胰蛋白酶溶液以启动细胞分离过程。随后，将细胞悬液转移至试管中，以350×g的速度离心5分钟。之后，将细胞重新放入预热的细胞培养基中，并将细胞悬浮液稀释至100,000个细胞/ml的接种密度。

细胞迁移实验的实施

在每个接收板孔中，加入200μl的含或不含化学引诱剂的培养基（不同浓度的FCS从0.25%至10%）。然后，将上述制备的细胞悬液以50μl的量加入各孔中。接着，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养24小时。

处理与检测

实验后，从接收板的每个孔中吸出细胞培养基。并向接收孔中加入150μl无血清培养基和8μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM，然后在37°C、5% CO₂的培养箱中培养45分钟。之后，将膜板和接收板的培养基吸出，并用PBS冲洗两块板孔。

接下来，向接收板中加入胰蛋白酶溶液，使膜下侧迁移的细胞开始脱离。胰蛋白酶溶液需要孵育10分钟，期间轻轻摇动。将180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每个孔中，最后在激发波长为485nm，发射波长为520nm的读板器中读取荧光。

有效的实验监测与数据分析

从膜板各孔中吸出培养基后，使用预湿棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转棉签，以去除膜上部（顶端）未迁移的细胞。利用绿色通道的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。此外，ThinCert®96孔HTS小室由于其独特的孔结构，提供了高透明度，促进活细胞观察，便于检查细胞形态、评估细胞融合，并以更高的准确性和可靠性进行污染监测。因此，每次实验都配备有对细胞的连续显微镜监测。

结论

在寻找更好的生物标志物、治疗靶点和药物以干预肿瘤转移、血管生成和炎症性疾病等复杂现象方面，体外细胞迁移实验是不可或缺的工具。它们提供了一个可控的环境来测量细胞迁移和分析不同分子的影响，如生长因子和趋化因子，或候选药物。在迁移实验中，孔径的精确选择至关重要，孔径必须与所研究细胞的尺寸成比例，既具有足够的限制性以防止细胞被动移动，又具有足够的允许性以促进其主动迁移。